30种滇西植物β-羟高铁血红素形成抑制活性(5)

XIAO CJ, XU W, LIU ZQ, et al., 2014. Evaluation of the antimalarial activity of 25 herbal medicines from West Yunnan [J]. J Pathog Biol, 9(6): 542-545. [肖朝江, 徐伟, 刘子琦, 等, 2014. 滇西地区25种药用植物抗疟活性研究 [J]. 中国病原生物学杂志, 9(6): 542-545.]

XU YJ, PIETERS L, 2013. Recent developments in antimalarial natural products isolated from medicinal plants [J]. Mini-Rev Med Chem, 13(7): 1056-1072.

ZHANG L, FENG J, ZHANG SS, et al., 2017. Malaria situation in the People’s Republic of China in 2016 [J]. Chin J Parasitol Parasit Dis Dec, 35(6): 515-519. [张丽, 丰俊, 张少森, 等, 2017. 2016年全国疟疾疫情分析 [J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 35(6): 515-519.]

XIAO CJ, SHEN Y, XU W， et al.β-hematin formation inhibition activity of thirty plants from West Yunnan [J]. Guihaia， 2019， 39(7): 863-872.

疟疾是一种由疟原虫引起的严重危害人类健康的疾病之一。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界91个疟疾流行国家和地区2016年共有2.16亿疟疾病例，因疟疾死亡人数达44.5万。其中，90%的疟疾病例和91%的死亡病例发生在撒哈拉以南的非洲地区，7%的疟疾病例和6%的死亡病例发生在东南亚地区(World Health Organization, 2017a)。另外，2014年全球疟疾病例为2.1亿例，2015年为2.11亿例，2016年为2.16亿例，明显呈现逐年上升的趋势(World Health Organization, 2017a)。在我国，经过几代人的努力，从建国初期疟疾发病人数高达3 000万例到2016年的3 321例来看，我国疟疾防治工作取得了显著成效(张丽等, 2017)。虽然我国疟疾防治工作取得了长足发展，并且2016年99.9%的疟疾病例为境外输入性病例，但在云南边境地区和西藏林芝地区本地疟疾病例依然存在(张丽等, 2017)。加上中国的西藏自治区和云南省地理位置特殊，与印度、尼泊尔、缅甸和越南等周边疟疾高发的南亚、东南亚国家接壤，边民来往十分频繁，传染源输入无法杜绝。因此，我国疟疾防控形势依然不容乐观。目前，临床用于治疗疟疾的药物主要为奎宁和青蒿素两类(World Health Organization, 2010, 2015)。由于长期使用氯喹和青蒿素，其疟原虫抗药株已逐步显现(Imwong et al., 2017; Price et al., 2014; World Health Organization, 2017b)。因此，研发新一代抗疟药物对疟原虫病防治工作意义重大。研究发现，游离血红素对疟原虫有毒性，疟原虫通过将血红素转换成疟原虫色素(β-羟高铁血红素)的方式解毒(Orjih et al., 1981; Pagola et al., 2000; Slater et al., 1991)。与此同时，奎宁等红内期抗疟药可与血红素络合从而抑制β-羟高铁血红素形成，成为红内期抗疟药物的作用靶点之一(Chong & Sullivan Jr, 2003)。因此，本研究采用β-羟高铁血红素形成抑制实验对30种滇西植物进行抗疟活性筛选，并对活性较好的植物样品进行初步的HPLC分析，以期能发现若干种活性较强的植物，为寻找和开发继奎宁、青蒿素之后的第三代植物来源的新型抗疟天然产物奠定基础。1 材料与方法1.1试剂和仪器试剂：氯高铁血红素、氯喹二磷酸盐、HEPES均购于美国Sigma公司；吡啶、冰醋酸均购于上海申博化工有限公司；乙酸钠购于国药集团化学试剂有限公司；二甲基亚砜购于天津化学试剂有限公司；色谱甲醇购于Fisher Chemical公司；HPLC用水为市售娃哈哈矿泉水。仪器：BioTek Synergy HT多功能酶标仪为美国BioTek仪器公司生产；MCO-18AIC CO2培养箱为日本三洋公司生产；AL204电子天平为梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司生产；EYELA FDU-2100冷冻干燥机为日本东京理化器械株式会社生产；RE-5205旋转蒸发器为上海亚荣生化仪器厂生产；Agilent 1260高效液相色谱仪为美国安捷伦科技有限公司生产植物样品30种植物样品(表1)均于2013年采自滇西地区，由大理大学药学与化学学院生药教研室张德全博士鉴定，植物标本均存放于大理大学药学与化学学院姜北教授研究组。表 1 抗疟活性筛选供试植物及其粗提物提取率Table 1 Species and extracting rate of screened plants for anti-malarial activity植物名Plant name科名Family name属名Generic name供试部位Tested parts提取率Extraction ratio (%)乙醇Ethanol水Water西南委陵菜Potentilla lineata蔷薇科Rosaceae委陵菜属Potentilla地上地下反瓣老鹳草Geranium refractum牻牛儿苗科Geraniaceae老鹳草属Geranium地上地下拔毒散Sida szechuensis锦葵科Malvaceae黄花稔属Sida全株高河菜Megacarpaea delavayi十字花科Cruciferae高河菜属Megacarpaea地上滇黄芩Scutellaria amoena唇形科Labiatae黄芩属Scutellaria地上地下土香薷Origanum vulgare唇形科Labiatae牛至属Origanum全株广防风Epimeredi indica唇形科Labiatae广防风属Epimeredi全株曲苞芋Remusatia pumila天南星科Araceae曲苞芋属Remusatia全株接骨木Sambucus williamsii忍冬科Caprifoliaceae接骨木属Sambucus地上云南贯众Cyrtomium yunnanense鳞毛蕨科Dryopteridaceae贯众属Cyrtomium地下四翅月见草Oenothera tetraptera柳叶菜科Onagraceae月见草属Oenothera全株蓝花野茼蒿Crassocephalum rubens菊科Compositae野茼蒿属Crassocephalum全株苣荬菜Sonchus brachyotus菊科Compositae苦苣菜属Sonchus全株挖耳草Carpesium nepalense菊科Compositae天名精属Carpesium全株灯盏细辛Erigeron breviscapus菊科Compositae飞蓬属Erigeron全株一枝箭Crepis napifera菊科Compositae还阳参属Crepis全株玉叶金花Mussaenda pubescens茜草科Rubiaceae玉叶金花属Mussaenda地上木芙蓉Hibiscus mutabilis锦葵科Malvaceae木槿属Hibiscus地上回心草Rhodobryum roseum真藓科Bryacea大叶藓属Rhodobryum全株瑞香狼毒Stellera chamaejasme瑞香科Thymelaeaceae狼毒属Stellera全株大理山梗菜Lobelia taliensis桔梗科Campanulaceae半边莲属Lobelia全株刺天茄Solanum indicum茄科Solanaceae茄属Solanum全株龙葵S. nigrum茄科Solanaceae茄属Solanum全株鞍叶羊蹄甲Bauhinia brachycarpa云实科Caesalpiniaceae羊蹄甲属Bauhinia地上心瓣蝇子草Silene cardiopetala石竹科Caryophyllaceae蝇子草属Silene全株小苞黄芪Astragalus prattii var. prattii豆科Leguminosae黄芪属Astragalus全株姜花Hedychium coronarium姜科Zingiberaceae姜花属Hedychium全株云南甘草Glycyrrhiza pallidiflora豆科Leguminosae甘草属Glycyrrhiza地上虾子花Woodfordia fruticosa千屈菜科Lythraceae虾子花属Woodfordia地上东方紫金牛Ardisia elliptica紫金牛科Myrsinaceae紫金牛属Ardisia地上1.3植物提取物的制备取约50 g干燥的植物样品粉碎，依次用75%乙醇、蒸馏水热回流提取。处理过程：(1)用75%乙醇回流提取3次(每次250 mL)，将3次提取的溶液合并后在50 ℃下用旋转蒸发器除去大部分溶剂，之后转移至冷冻干燥机上充分干燥。(2)经75%乙醇提取过的植物残渣继续用蒸馏水回流提取3次，合并提取液蒸馏近干，之后转移至冷冻干燥机上充分干燥。(3)精密称取上述植物提取物浸膏干粉5.0 mg，以1 mL蒸馏水溶解得相应溶液，之后用水按比例(1∶4)稀释成系列浓度溶液备用。植物提取率以冻干粉重量除以提取植物样品干重后乘以100%计算。表 2 30种供试植物β-羟高铁血红素形成抑制活性筛选结果Table 2β-Hematin formation inhibition activity of thirty screened plantsn=3)样品名Sample name粗提物Crude extract不同浓度植物样品的β-羟高铁血红素形成抑制率Inhibition rates of β-hematin formation in screenedsamples with different concentrations (%)1 (μg·mL-1)氯喹二磷酸盐 Chloroquine diphosphate salt—84.7 ± 3.688.2 ± 3.188.4 ± 5.31.5 ± 3.4-2.1 ± 1.134.6 ± 1.6西南委陵菜(地上)Potentilla lineata (Overground)醇提物Ethanol ± 1.8-13.2 ± 1.9-11.4 ± 3.50.6 ± 5.80.8 ± 3.8无活性Inactive水提物Water ± 5.0-11.7 ± 0.3-4.3 ± 0.6-0.9 ± 0.42.5 ± 2.3>1 388.9西南委陵菜(地下)P. lineata(Underground)醇提物Ethanol ± 3.4-6.7 ± 1.02.2 ± 0.82.7 ± 0.1-1.0 ± 2.7>1 388.9水提物Water ± 1.0-12.1 ± 1.6-1.7 ± 2.0-6.6 ± 0.4-0.1 ± 2.6无活性Inactive反瓣老鹳草(地上)Geranium refractum(Overground)醇提物Ethanol ± 0.9-22.2 ± 1.7-7.9 ± 5.30.1 ± 5.89.6 ± 8.7无活性Inactive水提物Water ± 5.9-24.5 ± 1.3-14.1 ± 1.3-2.6 ± 2.51.2 ± 0.2>1 388.9反瓣老鹳草(地下) G. refractum(Underground)醇提物Ethanol ± 3.839.2 ± 5.425.2 ± 5.73.6 ± 3.2-7.0 ± 3.41 388.9水提物Water ± 1.915.4 ± 5.116.6 ± 1.29.0 ± 0.27.5 ± 18.2>1 388.9拔毒散Sida szechuensis醇提物Ethanol ± 4.422.7 ± 4.212.0 ± 1.615.1 ± 8.240.0 ± 3.3>1 388.9水提物Water ± 3.328.7 ± 4.717.3 ± 4.123.5 ± 4.213.4 ± 1.3>1 388.9高河菜Megacarpaea delavayi醇提物Ethanol ± 4.441.2 ± 5.514.4 ± 5.719.1 ± 3.911.5 ± 1.6>1 388.9水提物Water ± 10.20.6 ± 4.311.7 ± 5.70.1 ± 6.19.9 ± 4.3>1 388.9滇黄芩(地上)Scutellaria amoena(Overground)醇提物Ethanol ± 1.912.6 ± 8.95.3 ± 13.027.4 ± 2.312.3 ± 6.6>1 388.9水提物Water ± 12.76.8 ± 0.41.5 ± 9.62.7 ± 3.6-0.7 ± 2.9>1 388.9滇黄芩(地下)S. amoena(Underground)醇提物Ethanol ± 6.0-4.5 ± 6.613.8 ± 7.825.6 ± 2.313.5 ± 6.8>1 388.9水提物Water ± 1.41.2 ± 1.36.3 ± 7.76.1 ± 0.510.4 ± 9.8无活性Inactive土香薷Origanum vulgare醇提物Ethanol ± 3.6-4.2 ± 1.51.3 ± 1.78.4 ± 0.88.1 ± 3.5无活性Inactive水提物Water ± 1.9-4.9 ± 0.8-2.7 ± 1.42.2 ± 1.06.9 ± 3.5>1 388.9广防风Epimeredi indica醇提物Ethanol ± 1.8-11.1 ± 1.3-6.1 ± 1.24.6 ± 0.38.6 ± 1.9无活性Inactive水提物Water ± 2.0-6.6 ± 2.12.3 ± 1.88.3 ± 2.113.3 ± 0.3无活性Inactive曲苞芋Remusatia pumila醇提物Ethanol ± 0.2-10.5 ± 0.6-10.7 ± 0.6-4.3 ± 1.30.0 ± 1.7无活性Inactive水提物Water ± 3.39.8 ± 1.37.5 ± 4.43.6 ± 0.50.9 ± 2.4>1 388.9接骨木Sambucus williamsii醇提物Ethanol ± 3.8-8.0 ± 2.3-2.1 ± 0.44.0 ± 1.80.5 ± 5.6无活性Inactive水提物Water ± 3.1-6.6 ± 2.7-5.6 ± 6.0-0.4 ± 4.81.7 ± 2.1>1 388.9云南贯众Cyrtomium yunnanense醇提物Ethanol ± 0.9-15.6 ± 1.2-8.4 ± 1.16.5 ± 2.99.4 ± 1.8无活性Inactive续表2样品名Sample name粗提物Crude extract不同浓度植物样品的β-羟高铁血红素形成抑制率Inhibition rates of β-hematin formation in screenedsamples with different concentrations (%)1 (μg·mL-1)水提物Water ± 3.82.5 ± 2.42.7 ± 1.77.4 ± 3.08.8 ± 5.8>1 388.9四翅月见草Oenothera tetraptera醇提物Ethanol ± 2.2-16.5 ± 0.5-15.0 ± 1.6-3.7 ± 2.82.5 ± 4.0无活性Inactive水提物Water ± 4.8-14.1 ± 0.4-8.6 ± 3.7-3.5 ± 4.50.6 ± 2.4>1 388.9蓝花野茼蒿Crassocephalum rubens醇提物Ethanol ± 2.8-15.8 ± 0.6-11.0 ± 3.9-3.3 ± 0.0-0.3 ± 3.1无活性Inactive水提物Water ± 1.21.2 ± 2.36.2 ± 1.94.8 ± 1.26.2 ± 2.7无活性Inactive苣荬菜Sonchus brachyotus醇提物Ethanol ± 1.6-17.8 ± 0.4-13.0 ± 0.8-9.5 ± 1.2-7.1 ± 5.0无活性Inactive水提物Water ± 0.3-12.1 ± 0.2-7.1 ± 1.6-7.6 ± 0.4-6.0 ± 1.1无活性Inactive挖耳草Carpesium nepalense醇提物Ethanol ± 1.1-15.4 ± 0.9-9.7 ± 3.3-4.8 ± 1.50.4 ± 2.6无活性Inactive水提物Water ± 0.3-7.2 ± 2.1-2.2 ± 2.4-1.8 ± 2.2-1.8 ± 2.7无活性Inactive灯盏细辛Erigeron breviscapus醇提物Ethanol ± 5.2-8.2 ± 2.2-0.5 ± 1.49.3 ± 4.63.4 ± 0.3无活性Inactive水提物Water ± 0.5-2.1 ± 1.76.2 ± 2.313.7 ± 1.65.8 ± 0.1无活性Inactive一枝箭Crepis napifera醇提物Ethanol ± 3.9-11.2 ± 1.0-2.3 ± 5.113.7 ± 3.413.4 ± 0.3无活性Inactive水提物Water ± 1.45.8 ± 1.813.7 ± 2.110.1 ± 4.212.5 ± 1.0无活性Inactive玉叶金花Mussaenda pubescens醇提物Ethanol ± 0.8-14.9 ± 1.3-5.2 ± 0.46.2 ± 1.57.4 ± 4.2无活性Inactive水提物Water ± 0.9-3.3 ± 2.7-1.8 -0.8 ± 5.41.2 ± 0.7>1 388.9木芙蓉Hibiscus mutabilis醇提物Ethanol ± 0.6-15.4 ± 1.5-7.5 ± 0.91.6 ± 1.51.7 ± 0.6无活性Inactive水提物Water ± 6.3-4.0 ± 2.92.3 ± 2.13.7 ± 2.15.6 ± 1.8>1 388.9回心草Rhodobryum roseum醇提物Ethanol ± 1.0-16.3 ± 0.8-16.6 ± 0.7-5.5 ± 1.8-0.4 ± 1.6无活性Inactive水提物Water ± 2.7-5.4 ± 0.50.3 ± 1.66.8 ± 1.55.4 ± 2.3>1 388.9瑞香狼毒Stellera chamaejasme醇提物Ethanol ± 3.324.6 ± 1.9-0.9 ± 0.83.2 ± 3.03.7 ± 2.2>1 388.9水提物Water ± 2.5-0.9 ± 3.35.2 ± 0.48.7 ± 3.45.9 ± 4.6无活性Inactive大理山梗菜Lobelia taliensis醇提物Ethanol ± 0.7-14.2 ± 1.1-3.2 ± 2.58.2 ± 2.57.8 ± 0.7无活性Inactive水提物Water ± 0.42.9 ± 1.01.7 ± 0.56.9 ± 1.25.8 ± 0.8无活性Inactive刺天茄Solanum indicum醇提物Ethanol ± 1.9-15.4 ± 1.8-11.5 ± 0.30.3 ± 1.49.6 ± 2.6无活性Inactive水提物Water ± 1.8-10.8 ± 2.0-0.8 ± 3.27.6 ± 5.66.3 ± 4.2无活性Inactive龙葵S. nigrum醇提物Ethanol ± 2.4-11.0 ± 3.85.1 ± 3.315.6 ± 0.117.0 ± 2.1无活性Inactive水提物Water ± 0.6-4.5 ± 2.60.1 ± 0.111.0 ± 1.113.1 ± 1.7无活性Inactive续表2样品名Sample name粗提物Crude extract不同浓度植物样品的β-羟高铁血红素形成抑制率Inhibition rates of β-hematin formation in screenedsamples with different concentrations (%)1 (μg·mL-1)鞍叶羊蹄甲Bauhinia brachycarpa醇提物Ethanol ± 1.9-18.3 ± 1.1-6.5 ± 1.67.9 ± 2.814.8 ± 0.7无活性Inactive水提物Water ± 1.5-4.7 ± 3.05.2 ± 3.310.3 ± 1.411.2 ± 4.1无活性Inactive心瓣蝇子草Silene cardiopetala醇提物Ethanol ± 1.0-11.5 ± 1.5-15.9 ± 0.9-8.3 ± 2.2-7.0 ± 2.1无活性Inactive水提物Water ± 1.1-6.9 ± 2.1-2.8 ± 1.0-2.5 ± 1.3-1.2 ± 5.1无活性Inactive小苞黄芪Astragalus prattiivar. prattii醇提物Ethanol ± 0.79.6 ± 3.9-8.9 ± 1.9-1.8 ± 0.91.4 ± 0.3>1 388.9水提物Water ± 2.14.1 ± 0.25.2 ± 1.55.5 ± 0.96.0 ± 1.2>1 388.9姜花Hedychium coronarium醇提物Ethanol ± 13.910.4 ± 3.87.0 ± 3.05.2 ± 4.04.8 ± 4.7>1 388.9水提物Water ± 2.923.9 ± 2.06.5 ± 1.93.0 ± 2.72.1 ± 4.21 033.0云南甘草Glycyrrhiza pallidiflora醇提物Ethanol ± 3.9-18.8 ± 0.3-11.8 ± 3.3-3.3 ± 0.7-1.7 ± 2.9>1 388.9水提物Water ± 1.8-15.3 ± 0.7-9.0 ± 3.3-0.6 ± 1.0-1.4 ± 1.0无活性Inactive虾子花Woodfordia fruticosa醇提物Ethanol extract0.-5.-5.-0.无活性Inactive水提物Water extract89.-4.-2.东方紫金牛Ardisia elliptica醇提物Ethanol extract-0.-1.无活性Inactive水提物Water extract74.-1.-0.图 1 虾子花醇提物和水提物的HPLC分析结果Fig. 1 HPLC results of ethanol and water extracts ofWoodfordiafruticosa图 2 东方紫金牛醇提物和水提物的HPLC分析结果Fig. 2 HPLC results of ethanol and water extracts β-羟高铁血红素形成抑制实验参照肖朝江等(2014)对30种滇西植物进行β-羟高铁血红素形成抑制活性测试的方法。将50 μL不同浓度的供试样品和50 μL氯高铁血红素储备液(1.0 mmol·mL-1，溶解于DMSO中)混合于96孔板中，一式3份；同时，设置蒸馏水阴性对照和氯喹二磷酸盐阳性对照。之后每孔加入80 μL的醋酸盐缓冲液(4 mol·mL-1，pH 5.0)，置于50 ℃培养箱中孵育5 h；取出待室温后，每孔加入100 μL 30%(v/v)的吡啶-HEPES溶液(20 mmol·mL-1，pH 7.5)使微孔板中固体混悬；室温放置待未反应的羟高铁血红素溶解完全后，从每孔中精密移取50 μL上清液至另一96孔板中，之后均以200 μL上述吡啶-HEPES溶液稀释，并于405 nm波长处测定吸光值。由羟高铁血红素标准曲线得出未反应的羟高铁血红素的浓度，从而计算出供试品对β-羟高铁血红素形成的抑制浓度(以IC50表示)分析方法色谱柱为phenomenex C18(250 mm×4.60 mm, 5 μm)，检测波长220 nm，体积流量1 mL·min-1，进样量20 μL，柱温30 ℃。虾子花提取物洗脱程序：水(A)-甲醇(B)：0～40 min，0%～35% B；40～50 min，35%～70% B；50～60 min，70%～100% B；60～70 min，100% B。东方紫金牛提取物洗脱程序：水(A)-甲醇(B)：0～30 min，0%～25% B；30～40 min，25%～50% B；40～50 min，50%～60% B；50～60 min，60%～100% B。2 结果与分析热回流提取实验(表1)表明，30种滇西产植物75%乙醇的平均提取率为21.7%，最高为39.0%(高河菜)；水的平均提取率为5.1%，最高为9.2%(拔毒散)。抗疟活性筛选结果(表2)表明，30种滇西植物中虾子花、东方紫金牛、姜花、反瓣老鹳草、拔毒散、高河菜、滇黄芩、土香薷、曲苞芋、接骨木、云南贯众、四翅月见草、西南委陵菜、玉叶金花、木芙蓉、回心草、瑞香狼毒、小苞黄芪和云南甘草19种植物具有不同程度的β-羟高铁血红素形成抑制活性。其中，虾子花、东方紫金牛、姜花水提物以及反瓣老鹳草地下部分醇提物的活性较好，其IC50值分别为796.0、951.0、1 033.0、1 388.9 μg·mL-1。此外，本实验筛选出来的活性植物涉及千屈菜科、紫金牛科、牻牛儿苗科等17个科，虾子花属、老鹳草属等19个属。运用SPSS统计软件(版本19.0)进行两独立样本均数比较的t检验，玉叶金花和回心草水提物以及云南甘草醇提物与阳性对照氯喹二磷酸盐对β-羟高铁血红素形成抑制活性差异具有统计学意义(P< 0.01)。两种活性较好的植物样品虾子花、东方紫金牛乙醇提取物、水提物的HPLC分析结果如图1和图2所示。根据图1和图2两个样品谱图中主要成分a-f峰的相关在线UV谱图，其为酚性成分的可能性极大，这与两种植物化学成分的研究报道结果相一致(Das et al., 2007; Mishra & Aeri, 2017; Okuda et al., 2006)。同时，鉴于两种植物样品水提物表现出较好的活性，d、f两个峰应为其重要的活性成分，值得注意。3 讨论随着疟原虫对奎宁类和青蒿素类抗疟药物耐药性的发现(Imwong et al., 2017; Price et al., 2014; World Health Organization, 2017b)，研发全新的抗疟药物已刻不容缓。目前，抗疟疾药物的研发主要通过对活性先导化合物进行结构修饰，或者合成其结构类似的衍生物的方式进行(Jampilek, 2017; Vangapandu et al., 2007)。虽然这种研发模式有一定的效果，但由于人工合成的化合物往往具有较大的毒副作用或与先导化合物具有相似作用机制而容易产生耐药性等因素，致使最终能应用于临床的抗疟药物寥寥无几。尽管近些年来抗疟疫苗已问世，但要应用到临床还需要很长一段时间(Birkett et al., 2013; Matuschewski, 2017)。此外，一些植物来源的非奎宁类和青蒿素类天然产物陆续被发现具有抗疟疾活性(Kayser et al., 2002; Mojab, 2012; Pohlit et al., 2013; Xu & Pieters, 2013)，且目前所筛选的植物种类与浩瀚的植物种类相比仅冰山一角。因此有理由相信，从植物中寻找、发现抗疟药物的可能性非常大，其前景必定广阔。β-羟高铁血红素形成抑制活性很可能具有化学结构、官能团类型的选择关联性，羟基尤其是酚羟基为β-羟高铁血红素形成抑制实验的主要活性基团(肖朝江等, 2016)。近年来有研究显示，含有多个酚羟基的黄酮类成分芹菜素具有显著的体内抗疟活性，其体内抑制伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)的活性在70 mg·kg-1·day-1时可达到70%，效果十分显著(Amiri et al., 2018)；本研究对芹菜素的研究结果表明，该化合物抑制β-羟高铁血红素形成的活性十分显著，其IC50达到168 μg·mL-1，从一个侧面反映了β-羟高铁血红素形成抑制活性与酚羟基以及体内抗疟活性之间的内在联系，对本研究中活性最好的两种植物样品的HPLC分析结果显示，其主成分均应是酚性成分，这进一步印证了上述联系，值得深入研究。分析本研究结果发现，供试的30种植物中有19个植物具有不同程度的β-羟高铁血红素形成抑制活性，显示出潜在的抗疟活性。这些活性植物醇提物的β-羟高铁血红素形成抑制活性总体弱于相应水提物的活性，提示抗疟活性较好的化合物可能为水溶性的、极性偏大的物质。本研究30种供试植物涵盖了21个科29个属，在植物科属分类范畴方面跨度较大，具有较高的代表性。所筛选出来的活性植物涉及17个科、19个属，进一步证实了从天然产物中发现奎宁、青蒿素等抗疟药物的合理性，以及今后从中发现新型抗疟先导化合物的可行性。因此，本研究为寻找、开发植物来源的新型抗疟天然产物奠定了一定的基础，并在一定程度上为进一步研究上述供试植物提供了参考。参考文献:AMIRI M, NOURIAN A, KHOSHKAM M, et al., 2018. Apigenin inhibits growth of thePlasmodiumbergheiand disrupts some metabolic pathways in mice [J]. Phytother Res, 32(9): AJ, MOORTHY VS, LOUCQ C, et al., 2013. Malaria vaccine R & D in the decade of vaccines: Breakthroughs, challenges and opportunities [J]. Vaccine, 31(Suppl. 2): CR, SULLIVAN JR DJ, 2003. Inhibition of heme crystal growth by antimalarials and other compounds: Implications for drug discovery [J]. Biochem Pharmacol, 66(11): P K, GOSWAMI S, CHINNIAH A, et al., : Traditional uses and recent findings [J]. J Ethnopharmacol, 110(2): M, SUWANNASIN K, KUNASOL C, et al., 2017. The spread of artemisinin-resistantPlasmodiumfalciparuminthe Greater Mekong subregion: A molecular epidemiology observational study [J]. Lancet Infect Dis, 17(5): J, 2017. Design of antimalarial agents based on natural products [J]. Curr Org Chem, 21(18): O, KIDERLEN AF, CROFT SL, 2002. Natural pro-ducts as potential antiparasitic drugs [J]. Stud Nat Prod Chem, 26(Part G): K, 2017. Vaccines against malaria—still a long way to go [J]. Febs J, 284(16): S, AERI V, 2017. Biotransformation of lignan glycoside to its aglycone byWoodfordiafruticosaflowers: Quantification of compounds using a validated HPTLC method [J]. Pharm Biol, 55(1): F, 2012. Antimalarial natural products: A review [J]. Avicenna J Phytomed, 2(2): T, YOSHIDA T, HATANO T, et al., 2006. Fractionation of pharmacologically active plant polyphenols by centrifugal partition chromatography [J]. J Liq Chromatogr, 13(18): A, BANYAL H, CHEVLI R, et al., 1981. Hemin lyses malaria parasites [J]. Science, 214(4521): S, STEPHENS PW, BOHLE DS, et al., 2000. The structure of malaria pigment β-haematin [J]. Nature, 404(6775): AM, LIMA RBS, FRAUSIN G, et al., 2013. Amazonian plant natural products: Perspectives for discovery of new antimalarial drug leads [J]. Molecules, 18(8): RN, VON SEIDLEIN L, VALECHA N, et al., 2014. Global extent of chloroquine-resistantPlasmodiumvivax: A systematic review and meta-analysis [J]. Lancet Infect Dis, 14(10): AFG, SWIGGARD WJ, ORTON BR, et al., 1991. An iron-carboxylate bond links the heme units of malaria pigment [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 88(2): S, JAIN M, KAUR K, et al., 2007. Recent advances in antimalarial drug development [J]. Med Res Rev, 27(1): HEALTH ORGANIZATION, 2010. Guidelines for the treatment of malaria: 2nd ed [S]. Geneva: World Health HEALTH ORGANIZATION, 2015. Guidelines for the treatment of malaria: 3rd ed [S]. Geneva: World Health HEALTH ORGANIZATION, 2017a. World Malaria Report 2017 [R]. Geneva: World Health HEALTH ORGANIZATION, 2017b. Artemisinin and artemisinin-based combination therapy resistance [R]. Geneva: World Health CJ, DONG X, HAN BY, et al., 2016. Antimalarial activity ofIsodonyuennanensis[J]. Chin Pharm J, 51(8): 612-615. [肖朝江， 董相， 韩冰洋, 等, 2016. 药用植物不育红抗疟活性研究 [J]. 中国药学杂志, 51(8): 612-615.]XIAO CJ, XU W, LIU ZQ, et al., 2014. Evaluation of the antimalarial activity of 25 herbal medicines from West Yunnan [J]. J Pathog Biol, 9(6): 542-545. [肖朝江, 徐伟, 刘子琦, 等, 2014. 滇西地区25种药用植物抗疟活性研究 [J]. 中国病原生物学杂志, 9(6): 542-545.]XU YJ, PIETERS L, 2013. Recent developments in antimalarial natural products isolated from medicinal plants [J]. Mini-Rev Med Chem, 13(7): L, FENG J, ZHANG SS, et al., 2017. Malaria situation in the People’s Republic of China in 2016 [J]. Chin J Parasitol Parasit Dis Dec, 35(6): 515-519. [张丽, 丰俊, 张少森, 等, 2017. 2016年全国疟疾疫情分析 [J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 35(6): 515-519.]

文章来源：《植物研究》 网址: http://www.zwyjzz.cn/qikandaodu/2020/1103/627.html