30种滇西植物β-羟高铁血红素形成抑制活性(3)

续表2样品名Sample name粗提物Crude extract不同浓度植物样品的β-羟高铁血红素形成抑制率Inhibition rates of β-hematin formation in screenedsamples with different concentrations (%)1 (μg·mL-1)鞍叶羊蹄甲Bauhinia brachycarpa醇提物Ethanol ± 1.9-18.3 ± 1.1-6.5 ± 1.67.9 ± 2.814.8 ± 0.7无活性Inactive水提物Water ± 1.5-4.7 ± 3.05.2 ± 3.310.3 ± 1.411.2 ± 4.1无活性Inactive心瓣蝇子草Silene cardiopetala醇提物Ethanol ± 1.0-11.5 ± 1.5-15.9 ± 0.9-8.3 ± 2.2-7.0 ± 2.1无活性Inactive水提物Water ± 1.1-6.9 ± 2.1-2.8 ± 1.0-2.5 ± 1.3-1.2 ± 5.1无活性Inactive小苞黄芪Astragalus prattiivar. prattii醇提物Ethanol ± 0.79.6 ± 3.9-8.9 ± 1.9-1.8 ± 0.91.4 ± 0.3>1 388.9水提物Water ± 2.14.1 ± 0.25.2 ± 1.55.5 ± 0.96.0 ± 1.2>1 388.9姜花Hedychium coronarium醇提物Ethanol ± 13.910.4 ± 3.87.0 ± 3.05.2 ± 4.04.8 ± 4.7>1 388.9水提物Water ± 2.923.9 ± 2.06.5 ± 1.93.0 ± 2.72.1 ± 4.21 033.0云南甘草Glycyrrhiza pallidiflora醇提物Ethanol ± 3.9-18.8 ± 0.3-11.8 ± 3.3-3.3 ± 0.7-1.7 ± 2.9>1 388.9水提物Water ± 1.8-15.3 ± 0.7-9.0 ± 3.3-0.6 ± 1.0-1.4 ± 1.0无活性Inactive虾子花Woodfordia fruticosa醇提物Ethanol extract0.-5.-5.-0.无活性Inactive水提物Water extract89.-4.-2.东方紫金牛Ardisia elliptica醇提物Ethanol extract-0.-1.无活性Inactive水提物Water extract74.-1.-0.

图 1 虾子花醇提物和水提物的HPLC分析结果Fig. 1 HPLC results of ethanol and water extracts ofWoodfordiafruticosa

图 2 东方紫金牛醇提物和水提物的HPLC分析结果Fig. 2 HPLC results of ethanol and water extracts ofArdisiaelliptica

1.4β-羟高铁血红素形成抑制实验

参照肖朝江等(2014)对30种滇西植物进行β-羟高铁血红素形成抑制活性测试的方法。将50 μL不同浓度的供试样品和50 μL氯高铁血红素储备液(1.0 mmol·mL-1，溶解于DMSO中)混合于96孔板中，一式3份；同时，设置蒸馏水阴性对照和氯喹二磷酸盐阳性对照。之后每孔加入80 μL的醋酸盐缓冲液(4 mol·mL-1，pH 5.0)，置于50 ℃培养箱中孵育5 h；取出待室温后，每孔加入100 μL 30%(v/v)的吡啶-HEPES溶液(20 mmol·mL-1，pH 7.5)使微孔板中固体混悬；室温放置待未反应的羟高铁血红素溶解完全后，从每孔中精密移取50 μL上清液至另一96孔板中，之后均以200 μL上述吡啶-HEPES溶液稀释，并于405 nm波长处测定吸光值。由羟高铁血红素标准曲线得出未反应的羟高铁血红素的浓度，从而计算出供试品对β-羟高铁血红素形成的抑制浓度(以IC50表示)。

1.5HPLC分析方法

色谱柱为phenomenex C18(250 mm×4.60 mm, 5 μm)，检测波长220 nm，体积流量1 mL·min-1，进样量20 μL，柱温30 ℃。虾子花提取物洗脱程序：水(A)-甲醇(B)：0～40 min，0%～35% B；40～50 min，35%～70% B；50～60 min，70%～100% B；60～70 min，100% B。东方紫金牛提取物洗脱程序：水(A)-甲醇(B)：0～30 min，0%～25% B；30～40 min，25%～50% B；40～50 min，50%～60% B；50～60 min，60%～100% B。

2 结果与分析

热回流提取实验(表1)表明，30种滇西产植物75%乙醇的平均提取率为21.7%，最高为39.0%(高河菜)；水的平均提取率为5.1%，最高为9.2%(拔毒散)。

抗疟活性筛选结果(表2)表明，30种滇西植物中虾子花、东方紫金牛、姜花、反瓣老鹳草、拔毒散、高河菜、滇黄芩、土香薷、曲苞芋、接骨木、云南贯众、四翅月见草、西南委陵菜、玉叶金花、木芙蓉、回心草、瑞香狼毒、小苞黄芪和云南甘草19种植物具有不同程度的β-羟高铁血红素形成抑制活性。其中，虾子花、东方紫金牛、姜花水提物以及反瓣老鹳草地下部分醇提物的活性较好，其IC50值分别为796.0、951.0、1 033.0、1 388.9 μg·mL-1。此外，本实验筛选出来的活性植物涉及千屈菜科、紫金牛科、牻牛儿苗科等17个科，虾子花属、老鹳草属等19个属。

运用SPSS统计软件(版本19.0)进行两独立样本均数比较的t检验，玉叶金花和回心草水提物以及云南甘草醇提物与阳性对照氯喹二磷酸盐对β-羟高铁血红素形成抑制活性差异具有统计学意义(P< 0.01)。

两种活性较好的植物样品虾子花、东方紫金牛乙醇提取物、水提物的HPLC分析结果如图1和图2所示。根据图1和图2两个样品谱图中主要成分a-f峰的相关在线UV谱图，其为酚性成分的可能性极大，这与两种植物化学成分的研究报道结果相一致(Das et al., 2007; Mishra & Aeri, 2017; Okuda et al., 2006)。同时，鉴于两种植物样品水提物表现出较好的活性，d、f两个峰应为其重要的活性成分，值得注意。

3 讨论

随着疟原虫对奎宁类和青蒿素类抗疟药物耐药性的发现(Imwong et al., 2017; Price et al., 2014; World Health Organization, 2017b)，研发全新的抗疟药物已刻不容缓。目前，抗疟疾药物的研发主要通过对活性先导化合物进行结构修饰，或者合成其结构类似的衍生物的方式进行(Jampilek, 2017; Vangapandu et al., 2007)。虽然这种研发模式有一定的效果，但由于人工合成的化合物往往具有较大的毒副作用或与先导化合物具有相似作用机制而容易产生耐药性等因素，致使最终能应用于临床的抗疟药物寥寥无几。尽管近些年来抗疟疫苗已问世，但要应用到临床还需要很长一段时间(Birkett et al., 2013; Matuschewski, 2017)。此外，一些植物来源的非奎宁类和青蒿素类天然产物陆续被发现具有抗疟疾活性(Kayser et al., 2002; Mojab, 2012; Pohlit et al., 2013; Xu & Pieters, 2013)，且目前所筛选的植物种类与浩瀚的植物种类相比仅冰山一角。因此有理由相信，从植物中寻找、发现抗疟药物的可能性非常大，其前景必定广阔。

文章来源：《植物研究》 网址: http://www.zwyjzz.cn/qikandaodu/2020/1103/627.html